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如何判斷色譜柱什么時(shí)候該換新柱了?

更新時(shí)間:2015-01-09      點(diǎn)擊次數:4393

色譜工作者常會(huì )碰到這樣的問(wèn)題,什么時(shí)候該換色譜柱了? 色譜柱的塔板數能體現色譜柱的狀態(tài)嗎?確定表明一支色譜柱應該“退休"的標準,從經(jīng)驗來(lái)看,當一支色譜柱的塔板數降低到新柱子時(shí)的百分之多少時(shí)就可以認為該色譜柱不能再使用了呢?在您的實(shí)驗室里是如何判斷一根色譜柱不可以再用了呢?
    相信每個(gè)色譜工作者都會(huì )關(guān)心分辨率,分辨率是考察一根色譜柱分離具體樣品的好壞程度的指標。色譜的核心任務(wù)就是為了使每個(gè)峰完成分離,我們在實(shí)際工作中需要得到合理峰寬的窄峰以便獲得較低的檢測限(這已經(jīng)不是什么難題,現在的色譜柱都可以達到這個(gè)要求)。
  
 較好的方法是使用壓力、分辨率和峰形的混合指標來(lái)考察一根色譜柱的狀態(tài)。壓力的測量是zui容易的,通常我們確定的色譜方法要滿(mǎn)足以下的要求:用新柱子時(shí)柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過(guò)3000psi。盡管現代的液相色譜系統都可在更高的壓力下使用,但由于高壓產(chǎn)生的系統損耗和泄漏的問(wèn)題會(huì )很?chē)乐?。當壓力超過(guò)3000psi時(shí),考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線(xiàn)濾片。如果更換濾片后壓力仍然高,則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經(jīng)被污染,這提示我們該換柱子了。有統計表明,超過(guò)60%的色譜柱損壞是由于壓力過(guò)高的原因。


分辨率是我們考察色譜柱的一個(gè)非常重要的指標,只要兩個(gè)組分可以獲得基線(xiàn)分離,對該分析物的定量就不會(huì )有什么問(wèn)題。對于對稱(chēng)的高斯峰來(lái)講,1.5的分辨率即可得到基線(xiàn)分離;若Rs在1.7至2.0之間則更好。若峰拖尾嚴重則需要更高的分辨率。使用分辨率作為色譜柱的評價(jià)指標的好處在于我們可以直觀(guān)地看到相鄰的峰的分離情況。
  另外一個(gè)考察色譜柱質(zhì)量的標準是峰形拖尾情況,廠(chǎng)家測試報告的峰形都非常漂亮,但這并不代表該色譜柱分析實(shí)際樣品的情況。實(shí)際樣品中總是含有或多或少引起峰形拖尾的組分。zui值得一提的是含有氮原子的化合物,這些化合物和硅膠骨架上的游離硅羥基結合非常緊密,隨著(zhù)色譜柱使用時(shí)間越長(cháng),鍵合相流失,拖尾則更加嚴重。然而拖尾情況的改變不像分辨率的改變那樣能夠馬上看出來(lái)?;诖?,定一個(gè)拖尾因子的上限,如美國藥典規定拖尾因子不超過(guò)1.8。
  確定色譜柱“拋棄"標準的*時(shí)間是當我們開(kāi)發(fā)分析方法或作方法認證的時(shí)候。通常,在開(kāi)發(fā)分析方法的過(guò)程中你會(huì )試驗幾根色譜柱,分析足夠多的實(shí)際樣品,你知道當分離變差的時(shí)候是什么樣的情況。我傾向于在開(kāi)始時(shí)使用一個(gè)寬的范圍。我們的經(jīng)驗是這樣的:你如果在開(kāi)始時(shí)緊縮系統適用性要求,在方法認證后再放寬這個(gè)要求是很困難的。在分析實(shí)際樣品之前進(jìn)行系統適用性考察,以確保該色譜方法滿(mǎn)足分析者可以接受的標準。


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