選液相色譜柱了解這些才能少走冤枉路

現(xiàn)代液相色譜分析中，色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時(shí)間，并且使方法更具穩(wěn)定性。

這里為大家提供一個(gè)液相色譜柱選擇的簡單思路：

1.確定分離目的確定你的應(yīng)用是否要求高分離度、短分析時(shí)間、高靈敏度、長柱壽命，低的實(shí)驗(yàn)成本等。

2.評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性、穩(wěn)定性等。

3.選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。

想要選適合的液相色譜柱，你需要先詳細(xì)了解它。這樣才能少走冤枉路！

液相色譜柱的參數(shù)——物理性質(zhì)

柱長，內(nèi)徑，如250*4.6mm。

長度的選擇：柱越長，總柱效越高（n值越大），柱越長，分析時(shí)間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物；500—600mm，要求較高分辨率的應(yīng)用，—般用來分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。

內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多。當(dāng)進(jìn)樣量超過柱容量時(shí)，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡，將會(huì)導(dǎo)致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現(xiàn)性不好。因此對(duì)于復(fù)雜樣品需要準(zhǔn)確分離，應(yīng)使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就應(yīng)使用內(nèi)徑大的柱子，目前實(shí)驗(yàn)室使用常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。

一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對(duì)于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。

粒徑，影響色譜分離度。

粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品，UPLC可以使用1.5μm的填料；另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。

孔徑和比表面積

孔徑，60A，120A，300A等?？讖叫。瑒t含孔率高，比表面積大，載碳量高；色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

比表面積，指的是每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g，與粒度和含孔率有關(guān)；比表面積大，會(huì)增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保留和分離度；比表面積小則可以縮短分析時(shí)間和平衡時(shí)間，并不是比表面積大或者小就更好，需要選擇合適的比表面積。

孔容和機(jī)械強(qiáng)度

孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度?？左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。

液相色譜柱的參數(shù)--化學(xué)性質(zhì)

填料基質(zhì)

硅膠基質(zhì)：純度高本錢低，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。

聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定（高溫可以達(dá)到80度以上），機(jī)械強(qiáng)度小。

含碳量

含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時(shí)間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品；低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。

鍵合相

鍵合試劑不同，對(duì)化合物的選擇性不同，一般長鏈的烷基鍵合相（C18 C8）比短鏈的（C4 C3）穩(wěn)定；非極性的鍵合相比極性的鍵合相（-NH2）穩(wěn)定。

封端

封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。

正相—反相色譜對(duì)比

液相色譜柱有正相和反相之分。目前市場上主要以反相色譜為主，約占80%的比例。

現(xiàn)在市面上的液相色譜柱琳瑯滿目，了解色譜柱的參數(shù)可以讓我們有一個(gè)初步的選擇，但由于各個(gè)儀器廠商的填料技術(shù)和鍵合技術(shù)仍有差異，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等。所以在選擇色譜柱前要好好研究色譜柱參數(shù)，仔細(xì)閱讀色譜柱說明書，才能找到合適的色譜柱和適宜的分離方法。